目的 通过对花青素苷相关合成基因的表达水平和代谢产物的分析，系统地阐明‘金华美女’叶色变异与基因表达的关系。 方法 以‘金华美女’为材料，‘贝拉大玫瑰’、杜鹃红山茶和红山茶为参照组，使用NCBI Primer Designing Tool设计山茶DFR、ANS、LAR、ANR和UFGT基因的荧光定量引物，使用实时荧光定量PCR仪测定这5个基因在叶片4个发育时期的表达量；采用高效液相色谱仪测定对应时期的多酚合成途径的主要次生代谢产物（儿茶素、表儿茶素），以及花青素苷合成途径的主要代谢产物矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量。 结果 表明：（1）在4个时期中，红叶品种叶片中DFR基因表达量与对照组差异不显著，ANS、LAR、ANR和UFGT基因在4个时期的表达量与对照组存在显著差异，这说明‘金华美女’类黄酮代谢途径相关基因在表达水平上发生了改变；（2）‘金华美女’叶片中多酚含量明显低于对照组，其中，表儿茶素含量仅为0.04~0.21 mg·g^-1，这说明在生理水平上，‘金华美女’叶片中多酚合成途径可能受阻；（3）‘金华美女’叶片中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量达1.2~1.4 mg·g^-1，4个生长阶段均显著高于对照组，这说明‘金华美女’叶片具备持续合成花青素苷的能力。 结论 根据试验结果，推断‘金华美女’叶色变异的主要原因可能是由于花青素还原酶基因的表达水平受到了抑制，降低了矢车菊素催化成表儿茶素的效率，使叶片类黄酮代谢途径中以多酚为主的合成方向转向花青素苷合成方向。

目的 鉴定分析金花茶花朵和叶片中主要化学成分、含量及其变化特征，为金花茶资源的进一步开发利用提供科学依据。 方法 利用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用（UPLC-QTOF-MS）技术定性定量分析金花茶花瓣、雄蕊、老叶和新叶中花青苷、类黄酮及儿茶素类成分与含量。 结果 花青苷天竺葵素-3-O-葡萄糖苷和矢车菊素-3-O-葡萄糖苷均为金花茶中首次发现，其中，矢车菊素-3-O-葡萄糖苷仅存在于紫红色新叶中。类黄酮木犀草素-7-O-芸香糖苷和染料木苷为金花茶中首次发现，槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-芸香糖苷和山柰酚-3-O-葡萄糖苷为金花茶叶片中首次发现。金花茶花瓣与雄蕊中花青苷相差不大，但却低于叶片尤其新叶；花朵中儿茶素类远高于叶片尤其新叶。金花茶花瓣和雄蕊中总黄酮及槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-芸香糖苷和山柰酚-3-O-葡萄糖苷均相差不大，但却远高于叶片。金花茶新叶中主要类黄酮成分木犀草素-7-O-芸香糖苷及总类黄酮明显高于老叶。 结论 金花茶中共鉴定出2种花青苷、6种类黄酮和2种儿茶素；槲皮素-3-O-葡萄糖苷等类黄酮是金花茶花朵呈现黄色的主要原因，矢车菊素-3-O-葡萄糖苷是金花茶新叶呈现紫红色的主要原因。

为研究A功能基因在山茶花重瓣形成过程中所发挥的功能,利用同源克隆和RACE扩增方法,从重瓣山茶花品种‘金盘荔枝’发育早期的花芽中获得了山茶花AP基因全长cDNA,命名为CjAPL1,GenBank登录号JX657332。该基因全长1 149 bp,其中,开放阅读框(ORF)长度为741 bp,5’非编码区长度206 bp,3’非编码区长度202 bp。经氨基酸序列分析表明:CjAPL1基因编码一条含有246个氨基酸的蛋白质,与猕猴桃、八仙花等植物的Ap1蛋白同源性均在75%以上。Rea- time PCR结果显示,CjAPL1基因在‘金盘荔枝’不同发育时期花芽中的表达量为:花芽发育早III期>花芽发育早II期>花芽发育早I期>现蕾期,表达趋势表现为先逐渐升高而后急剧降低;花器官不同部位中的表达量为花柱最高,其次为子房和萼片,在雄蕊下部和外轮花上部中的表达量最低。这些差异表明,CjAPL1基因可能在‘金盘荔枝’重瓣花形成中发挥作用。

根据植物肌动蛋白（Actin）基因编码区的保守序列设计引物，以山茶属植物荔波连蕊茶幼嫩茎段为材料，提取总RNA，进行RT-PCR。采用RACE技术扩增获得1 631 bp的Actin基因全长cDNA序列，命名为 ClActin1（GenBank登录号KF366912）。序列分析表明， ClActin1 开放阅读框（ORF）为1 134 bp，编码377个氨基酸，5’非编码区90 bp，3’非编码区407 bp。预测的 ClActin1 蛋白分子量为41.69 kD，理论等电点为5.31，具有Actin超基因家族的保守结构域和肌动蛋白家族特有的特征信号序列。 ClActin1 与GenBank中收录的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性在82%以上，氨基酸序列的相似性在97%以上。与其它植物肌动蛋白比较并构建系统进化树，结果显示山茶肌动蛋白与茶树和杨树的肌动蛋白的亲缘关系最为密切。实时荧光定量PCR结果显示，该基因在荔波边蕊茶不同组织器官及不同发育时期的表达量稳定，表明 ClActin1 基因可作为内参基因。

[目的]GA2氧化酶是赤霉素生物合成代谢过程中关键酶之一,GA2ox家族基因常被用于植物矮化基因工程育种。[方法]根据植物GA2氧化酶基因编码区的保守序列设计引物,以山茶属荔波连蕊茶嫩枝为材料,提取总RNA,进行RT-PCR。采用RACE技术扩增获得1 371 bp的GA2ox基因全长cDNA序列,命名为ClGA2ox1(GenBank登录号KJ502290)。[结果]序列分析表明,ClGA2ox1放阅读框(ORF)为1 002 bp,编码333个氨基酸,5'非编码区59 bp,3'非编码区310 bp。预测的蛋白质分子量为37.31 kD,等电点为5.92,具有GA2ox超基因家族的保守结构域和特有的氨基酸残基。ClGA2ox1蛋白与GenBank中收录的其它植物GA2ox蛋白氨基酸的相似性达到80%。构建系统进化树,结果显示山茶GA2氧化酶与烟草GA2ox蛋白的亲缘关系最为密切。实时定量PCR结果显示,该基因在荔波边蕊茶不同器官及发育不同时期的均有表达,表达量有所不同:ClGA2ox1基因在2年生茎段中的表达量最高,在嫩枝和根中也有较高的表达,而在新抽生的嫩叶中最低。[结论]试验结果为进一步明确ClGA2ox1基因的功能特征及揭示其参与调控植物生长的分子机制奠定基础。

［目的］ 利用分子生物学技术探讨杜鹃红山茶CaAPX基因的表达模式及在模式植物烟草中所起的抗寒、耐热作用，为今后山茶花抗逆育种奠定基础。［方法］ 根据山茶花同源序列设计特异性引物，利用同源克隆和3'，5'-RACE技术，从杜鹃红山茶嫩叶组织中克隆出抗坏血酸过氧化物酶（APX），命名为CaAPX，基因全长1 097 bp，开放阅读框753 bp，编码250个氨基酸。实时荧光定量PCR对杜鹃红山茶7种组织和温度胁迫下该基因的表达模式进行分析。［结果］ 表明：CaAPX基因在杜鹃红山茶7种组织中均得到表达，但表达水平不一，表达量由高到低依次为：未成熟果实 >嫩叶 >花苞 >叶芽 >种胚 >花瓣 >花芽，其中，未成熟果实中的表达量是其它组织的2.6811.44倍；温度胁迫处理8 h后该基因呈上调表达，CaAPX基因表达量分别是0 h的3.49和2.67倍。CaAPX基因转化烟草分析表明，过量表达CaAPX基因后，APX活性提高了2.584.09倍，抗坏血酸（AsA）含量提高了2.673.56倍，并且转基因烟草植株的抗寒、耐热能力也获得提高。［结论］ 通过过量表达CaAPX基因能够提高烟草植株的抗寒、耐热性，为山茶花抗逆育种提供了科学依据。